Molekularna dijagnostika: PCR u realnom vremenu

Trenutno je razvijen mehanizam u molekularnoj dijagnostici lančana reakcija polimeraze (PCR),

Načelo PCR je množenje određene patogen DNA fragmenata milijuna puta s DNA polimerazom u posebnoj jedinici tekstu termalni ciklički uređaj, koji daje ciklički ponavljanje temperaturnog režima za određeni program.

Dijagnoza PCR-a omogućuje ponoviti seriju amplifikacija, očuvajući aktivnost enzima. Kada pojačanje prođe neometano, u jednom ciklusu broj kopija određene regije patogenog DNK udvostručuje se nakon trideset ciklusa - stotinu i deset puta. Zbog toga se PCR upotrebljava u dijagnostici kako bi se identificirali dovoljno male patogene, čije otkrivanje je nemoguće bez toga.

Treba napomenuti da RNA ne može biti matrica za real-time PCR. Stoga, da bi se detektirala virusna RNA, potrebno je dobiti DNA koja odgovara njegovom fragmentu, prije amplifikacije. Lančana reakcija polimeraze omogućava mjerenje DNA i RNA patogena. Ovako dobivene informacije služe za praćenje učinkovitosti korištene terapije, kao i za procjenu kliničke prognoze.

Osim toga, u stvarnom vremenu PCR ne zahtijeva dodatne mjere u odnosu na dešifriranje ciljne DNA ili amplikonima, koji služe kao prepreka pravilnom dijagnozom i dovesti do pogrešnih rezultata. Ovaj pristup omogućuje da ne koriste korak elektroforezu, što dovodi do smanjenja rizika produkata reakcije lanca polimeraze. Isto tako, s obzirom na smanjenje broja manipulacija sa sredstvom, smanjuju vrijeme istraživanja, pojednostavljuje proces, smanjuje vjerojatnost pogreške. PCR je također vam omogućuje da odredite početni broj kopija DNK patogena u kliničkom ispitivanju kako bi se identificirali razdoblja pogoršanja bolesti i poduzeti pravodobne mjere za liječenje pacijenta.

Danas postoji veliki broj metoda pojačanje fiksacije u realnom vremenu. Najčešće korišteni razne tehnike prijavljuje produkt amplifikacije korelaciji s fluorogenske sondi, od kojih je intenzitet zračenja se mijenja ovisno o akumulaciji produkta amplifikacije i snimljenih u stvarnom vremenu pomoću posebnog uređaja naziva thermocycler s optičkim modulom. On pruža visoku razinu osjetljivosti analize. U isto PCR produkta može biti otkrivena, zajedno s velikom količinom nusproizvoda, u vrijeme kada se koristi elektroforeza ga u nekim slučajevima nije primijetio.

Uz PCR, pozitivni, kontrolni i negativni uzorci koriste se u stvarnom vremenu. Dakle, pozitivni i negativni uzorci tijekom studije analizirani su kao zasebni uzorci, tada se kontrolni uzorak dodaje svakom takvom uzorku i prolazi kroz sve faze analize.

Do danas postoji veliki broj instrumenata za lančana reakcija polimeraze. To uključuje Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid ili Roche. Svaki od njih ima zasluge i demere

Valja napomenuti da je PCR dijagnostička metoda koja se koristi u velikim znanstvenim, istraživačkim i dijagnostičkim centrima širom svijeta, jer omogućava trenutačno tumačenje dobivenih rezultata.